試薬
ナカライ社製のプロテインアッセイCBB溶液（5倍濃縮）
操作
1. 標準BSA溶液（2mg/ml）をサンプルのbufferを用いて適当濃度※1に希釈して標準タンパク質溶液を調製する。
2. サンプルのタンパク質濃度から推定して、スタンダードの濃度範囲に
入るようにMilli-Q水もしくはサンプルのbufferを用いて適当に希釈する。※2
3. CBB溶液（5倍濃縮）をMilli-Q水で5倍に希釈して、測定サンプル数に必要なCBB溶液をコニカルチューブに調製する。※3
4. スタンダード、ブランク（希釈に用いたMilli-Q水もしくはサンプルに用いたbuffer）および
サンプル20μl※4 にCBB溶液1mLを加え、十分に撹拌して室温にて10分間静置する。
5. 吸光度（595nm）を測定する。※5
6. 検量曲線よりタンパク質濃度を計算する。
※1 スタンダード溶液調製
| タンパク質濃度(mg/ml) | BSA溶液(μl) | Buffer(μl) |
| 0.4 | 20 | 80 |
| 0.7 | 35 | 65 |
| 1.0 | 50 | 50 |
| 1.5 | 75 | 25 |
※2 サンプルは推定されるタンパク質濃度に基づき、約0.5-1mg/mlになるように希釈する。
※3 1サンプル分多めに調製する。
※4 スタンダード、ブランクは3連で測定すると信頼性が増す。サンプルの測定回数はサンプル量による。
※5 吸光度計に付属のタンパク質定量プログラムを使用すると便利。セルは石英セルを用いないこと。
プラスチック製のセルを使用し、使用後はすみやかに70%エタノールで洗浄し、Milli-Q水ですすいで乾燥させる。
文責 中島